KONSTRUKSI DAN KLONING GEN CelE PENYANDI ENZIM SELULASE SEBAGAI KANDIDAT ENZIM BAGI INDUSTRI PANGAN DAN AGROINDUSTRI
DOI:
https://doi.org/10.29303/profood.v10i1.370Kata Kunci:
CelE, Enzim Selulase, Kloning DNA Rekombinan, Konstruksi DNA RekombinanAbstrak
Penelitian konstruksi dan kloning gen CelE, yang merupakan penyandi enzim selulase dari Ruminococcus plavefaciens, muncul sebagai respons terhadap kebutuhan mendesak akan sumber daya enzim yang efisien dalam industri pangan dan agroindustri. Enzim selulase, dengan fokus pada CelE, memiliki peran vital dalam proses degradasi selulosa, sebuah komponen utama dalam dinding sel tanaman. Keberadaan Ruminococcus plavefaciens sebagai sumber gen CelE menarik perhatian karena mikroorganisme ini terdapat dalam sistem pencernaan hewan ruminansia dan memiliki potensi besar untuk menghasilkan enzim selulase yang efisien. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membuat dan mengkloning plasmid pET15b dengan gen CelE. Konfirmasi gen CelE pada DNA rekombinan dilakukan dengan metode identifikasi resistensi bakteri host pada media dengan antibiotik dan koloni PCR. Penelitian ini dilaksanakan dengan menerapkan metode sebagai berikut: Pelaksanaan Optimasi Kodon dan Konstruksi Plasmid Rekombinan (CelE), Persiapan Sel Kompeten, Transformasi Sel, Uji PCR Koloni Transforman Hasil penelitian menunjukkan bahwa penelitian ini telah berhasil mendapatkan bakteri transforman yang diharapkan dengan hasil Uji PCR Koloni Transforman mendapatkan product size yang sesuai yaitu 205 bp, sehingga dapat disimpulkan plasmid pET15b dengan gen CelE yang telah dioptimasi berhasil dikonstruksi dan dikloning.
Referensi
Arthur, P.K., Alvarado, L.J. & Dayie, T.K. (2011) Expression, purification and analysis of the activity of enzymes from the pentose phosphate pathway. Protein Expression and Purification. 76 (2), 229–237. doi:10.1016/j.pep.2010.11.008.
Barokah, U., Unsunnidhal, L., Kristianingrum, Y.P. & Kusumawati, A. (2023) Transformation of HBcAg gene of hepatitis B virus using pEGFP-C1 vector. In: THE 5TH INTERNATIONAL CONFERENCE ON BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY. 2023 Mataram, AIP Publishing. p. doi:https://doi.org/10.1063/12.0020985.
Datta, R. (2024) Enzymatic degradation of cellulose in soil: A review. Heliyon. 10 (1), e24022. doi:10.1016/j.heliyon.2024.e24022.
Fathurrahman, I., Kusumawati, A., Rahman, A., Ulviani, Y., Prihantoko, K.D. & Unsunnidhal, L. (2022) Molecular sexing in Bos taurus using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) method. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 976 (1). doi:10.1088/1755-1315/976/1/012002.
Hua, D., Hendriks, W.H., Xiong, B. & Pellikaan, W.F. (2022) Starch and Cellulose Degradation in the Rumen and Applications of Metagenomics on Ruminal Microorganisms. Animals. 12 (21), 1–13. doi:10.3390/ani12213020.
Ishak, J., Unsunnidhal, L., Martien, R. & Kusumawati, A. (2019) In vitro evaluation of chitosan-DNA plasmid complex encoding Jembrana disease virus Env-TM protein as a vaccine candidate. Journal of Veterinary Research. 63 (1), 7–16. doi:https://doi.org/10.2478/jvetres-2019-0018.
Jannah, R. & Unsunnidhal, L. (2019) KONSTRUKSI DAN KLONING PLASMID PCDNA3 . 1 ( + ) DENGAN SUBGENOTIP B3 HEPATITIS B CORE ANTIGEN ( HBcAg ) SEBAGAI KANDIDAT VAKSIN DNA HEPATITIS B. Jurnal Penelitian dan Kajian Ilmiah Kesehatan. 5 (2), 125–131.
Rahman, A., Kusumawati, A., Budiyanto, A., Ulviani, Y., Fathurrahman, I., Prihantoko, K.D. & Unsunnidhal, L. (2022) Molecular Verification of Sex-separated Straw of Simmental Cattle ( Bos taurus ) by Polymerase Chain Reaction (PCR) . Proceedings of the 9th International Seminar on Tropical Animal Production (ISTAP 2021). 18 (Istap 2021), 223–226. doi:10.2991/absr.k.220207.046.
Tuttle, A.R., Trahan, N.D. & Son, M.S. (2021) Growth and Maintenance of Escherichia coli Laboratory Strains. Current Protocols. 1 (1), 1–13. doi:10.1002/cpz1.20.
Unsunnidhal, L., Ishak, J. & Kusumawati, A. (2019) Expression of gag-CA Gene of Jembrana Disease Virus with Cationic Liposomes and Chitosan Nanoparticle Delivery Systems as DNA Vaccine Candidates. Tropical Life Sciences Research. 30 (3), 15–36. doi:https://doi.org/10.21315/tlsr2019.30.3.2.
Unsunnidhal, L. & Jannah, R. (2019) POTENTIAL OF CATIONIC LIPOSOMES AND CHITOSAN NANOPARTICLES FOR DELIVERY DNA VACCINE MODEL NTC8685-EGFP. Jurnal Penelitian dan Kajian Ilmiah Kesehatan. 5 (2), 120–124.
Unsunnidhal, L., Jannah, R., Haris, A., Supinganto, A. & Kusumawati, A. (2021a) Potential of Nanoparticles Chitosan for Delivery pcDNA3.1-SB3- HBcAg. BIO Web of Conferences. 41 (07003), 1–6.
Unsunnidhal, L., Perdhana, F.F., Utama, Q.D. & Jannah, R. (2023) Identifikasi Kandungan Daging Sapi Menggunakan Polymerase Chain Reaction (PCR) Pada Pedagang Bakso Tusuk Keliling Di Lingkungan Kota Mataram, Nusa Tenggara Barat. Pro Food. 9 (1), 76–81. doi:10.29303/profood.v9i1.312.
Unsunnidhal, L., Wasito, R., Nugraha Setyawan, E.M., Warsani, Z. & Kusumawati, A. (2021b) Potential of polylactic-co-glycolic acid (PLGA) for delivery Jembrana disease DNA vaccine Model (pEGFP-C1-tat). Journal of Veterinary Science. 22 (6), 1–15. doi:10.4142/jvs.2021.22.e76.
Unsunnidhal, L., Wasito, R., Setyawan, E.M.N. & Kusumawati, A. (2021c) Potential of Nanoparticles Chitosan for Delivery pcDNA3.1-tat. BIO Web of Conferences. 41 (07004), 1–6.
